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基因擴增PCR儀的基本要素與DNA復制的基本要素是一致的

發布時間:2022-02-18瀏覽:113次

  PCR是分子生物學研究重要的工具,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。基因擴增PCR儀是由外殼、變溫反應腔、散熱系統、加熱系統、制冷系統、電子控制系統、供電系統、人機界面等各部分組成的,主要用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增等。
  基因擴增的基本要素與DNA復制的基本要素是一致的。
  1、DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,Z后擴增得到的產物是雙鏈狀態的。
  2、引物:是DNA復制的先鋒,就象結晶過程中的晶核,引導DNA的合成。在PCR擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復制的動力,在dNTP等底物存在時在引物的引導下沿著模板DNA合成互補的DNA鏈。
  4、緩沖液:提供DNA合成反應所需的pH,離子強度等環境。
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
  它可以在試管里建立反應,經過數小時之后,就能將極微量的目的基因或者某一特定的DNA片段擴增數十萬倍,乃至千百萬倍,而無需通過繁瑣費時的基因克隆程序,便可獲得足夠數量的精確的DNA拷貝,所以有人亦稱之為無細胞的分子克隆法。
  PCR反應一般設置20~40次循環,每一循環包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環的產物作為下一個循環的模板。PCR的擴增效率很高,如果循環次數是30次,那么新生DNA片段理論上達到230拷貝(約為109個分子)。擴增時加入的引物利用熒光素進行標記,使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結合,擴增結果通過熒光信號采集系統實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統,實時輸出量化結果。

 

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